今日科普|外周血细胞保存技术

### 外周血细胞保存技术

外周血细胞保存技术在现代医学和科研中扮演着至关重要的角色。随着免疫细胞疗法的快速发展，尤其是CAR-T细胞疗法在癌症治疗中的显著效果，如何有效保存外周血细胞，尤其是免疫细胞，成为了研究热点。本文将介绍外周血细胞保存技术的几个关键点，包括保存方法、保存条件及其对细胞活性的影响，并引用最新的相关热点话题。

保🈯中国存方法：非冷冻保存与低温保存

外周血细胞的保存方法主要分为非冷冻保存和低温保存两种。非冷冻保存是一种便捷且经济的短期储存方式，通常使用室温或4℃冰箱保存。这种方式适用于干细胞采集后需要立即进行预处理或经过短时间运输的情况。研究表明，4℃条件下保存干细胞，其活性在48小时内无明显下降。例如，有文献报道，4℃保存造血干细胞24小时和72小时后，CFU-GM（粒细胞-巨噬细胞集落形成单位）的回收率分别为81%和57%，BFU-E（红细胞爆式集落形成单位）为45%和28%。然而，非冷冻保存不适合长期储存，因为随着时间的推移，细胞活性会显著下降。

低温保存：使用冷冻保护剂的重要性

对于需要长期保存的外周血细胞，低(dī)温(wēn)保(bǎo)存(cún)是(shì)最(zuì)佳(jiā)选(xuǎn)择(zé)。低(dī)温(wēn)保(bǎo)存(cún)过(guò)程(chéng)中(zhōng)，为(wèi)了(le)防(fáng)止(zhǐ)细(xì)胞(bāo)内(nèi)冰(bīng)晶(jīng)形(xíng)成(chéng)、渗(shèn)透(tòu)压(yā)改(gǎi)变(biàn)和(hé)细(xì)胞(bāo)结(jié)构(gòu)紊(wěn)乱(luàn)，必(bì)须(xū)使(shǐ)用(yòng)冷(lěng)冻(dòng)保(bǎo)护(hù)剂(jì)。二(èr)甲(jiǎ)基(jī)亚(yà)砜(fēng)（DMSO）是(shì)最(zuì)常(cháng)用(yòng)的(de)细(xì)胞(bāo)冷(lěng)冻(dòng)保(bǎo)护(hù)剂(jì)，它(tā)能(néng)通(tōng)过(guò)渗(shèn)透(tòu)作(zuò)用(yòng)减(jiǎn)少(shǎo)细(xì)胞(bāo)内(nèi)水(shuǐ)分(fēn)，从(cóng)而(ér)减(jiǎn)少(shǎo)冰(bīng)晶(jīng)形(xíng)成(chéng)。通(tōng)常(cháng)在(zài)每(měi)次(cì)分(fēn)离(lí)后(hòu)将(jiāng)血(xuè)细(xì)胞(bāo)悬(xuán)液(yè)浓(nóng)缩(suō)至(zhì)50ml左(zuǒ)右(yòu)，加(jiā)入(rù)含(hán)DMSO的(de)RPMI 1640营(yíng)养(yǎng)液(yè)，使(shǐ)DMSO的(de)终(zhōng)浓(nóng)度(dù)为(wèi)10%，然(rán)后(hòu)分(fēn)装(zhuāng)于(yú)血(xuè)液(yè)冻(dòng)存(cún)袋(dài)内(nèi)，经(jīng)程(chéng)控(kòng)冷(lěng)冻(dòng)系(xì)统(tǒng)降(jiàng)温(wēn)至(zhì)-80℃，再(zài)投(tóu)入(rù)液(yè)氮(dàn)中(zhōng)（-196℃）贮(zhù)存(cún)。研(yán)究(jiū)证(zhèng)明(míng)，使(shǐ)用(yòng)DMSO作(zuò)为(wèi)冷(lěng)冻(dòng)保(bǎo)护(hù)剂(jì)，PBSC（外(wài)周(zhōu)血(xuè)造(zào)血(xuè)干(gàn)细(xì)胞(bāo)）经(jīng)-196℃液(yè)氮(dàn)保(bǎo)存(cún)后(hòu)，CD34+细(xì)胞(bāo)无(wú)明(míng)显(xiǎn)减(jiǎn)少(shǎo)，细(xì)胞(bāo)活(huó)力(lì)和(hé)CFU-GM回(huí)收(shōu)率(lǜ)也(yě)较(jiào)高(gāo)。

保(bǎo)存(cún)条(tiáo)件(jiàn)与(yǔ)细(xì)胞(bāo)活(huó)性(xìng)：温(wēn)度(dù)与(yǔ)保(bǎo)护(hù)剂(jì)的(de)选(xuǎn)择(zé)

保(bǎo)存(cún)条(tiáo)件(jiàn)对(duì)外(wài)周(zhōu)血(xuè)细(xì)胞(bāo)活(huó)性(xìng)至(zhì)关重(zhòng)要(yào)。选(xuǎn)择(zé)合(hé)适(shì)的(de)保(bǎo)存(cún)液(yè)、温(wēn)度(dù)和(hé)容(róng)器(qì)是(shì)保(bǎo)证(zhèng)细(xì)胞(bāo)存(cún)活(huó)率(lǜ)的(de)关键。除(chú)了(le)DMSO，其(qí)他(tā)保(bǎo)护(hù)剂(jì)如(rú)羟(qiǎng)乙(yǐ)基(jī)淀(diàn)粉(fěn)（HES）和(hé)右(yòu)旋(xuán)糖(táng)酐(gān)（Dextran）也(yě)能(néng)减(jiǎn)少(shǎo)结(jié)晶(jīng)物(wù)产(chǎn)生(shēng)，作(zuò)为(wèi)冻(dòng)存(cún)保(bǎo)护(hù)剂(jì)使(shǐ)用(yòng)。例(lì)如(rú)，使(shǐ)用(yòng)6%HES和(hé)5%DMSO作(zuò)为(wèi)PBS{干(gàn)扰(rǎo)符(fú)}C的(de)冷(lěng)冻(dòng)防(fáng)护(hù)剂(jì)，不(bù)经(jīng)程(chéng)控(kòng)降(jiàng)温(wēn)直(zhí)接(jiē)在(zài)-80℃冰(bīng)箱(xiāng)中(zhōng)保(bǎo)存(cún)，结(jié)果(guǒ)显(xiǎn)示(shì)CFU-GM和(hé)BFU-E回(huí)收(shōu)率(lǜ)分(fēn)别(bié)高(gāo)达(dá)86.6%±12.3%和(hé)71.8%±14.7%。此(cǐ)外(wài)，解(jiě)冻(dòng)过(guò)程(chéng)同(tóng)样(yàng)影(yǐng)响(xiǎng)细(xì)胞(bāo)活(huó)性(xìng)，合(hé)理(lǐ)的(de)解(jiě)冻(dòng)方(fāng)法(fǎ)是(shì)快(kuài)速(sù)复(fù)温(wēn)，即(jí)在(zài)40℃水(shuǐ)浴(yù)中(zhōng)快(kuài)速(sù)解(jiě)冻(dòng)，以(yǐ)减(jiǎn)少(shǎo)细(xì)胞(bāo)破(pò)坏(huài)。解(jiě)冻(dòng)后(hòu)的(de)PBSC一(yī)般(bān)不(bù)需(xū)洗(xǐ)涤(dí)和(hé)稀(xī)释(shì)，可(kě)直(zhí)接(jiē)回(huí)输(shū)，以(yǐ)减(jiǎn)少(shǎo)细(xì)胞(bāo)损(sǔn)失(shī)。

外(wài)周(zhōu)血(xuè)细(xì)胞(bāo)保(bǎo)存(cún)技(jì)术(shù)的(de)发(fā)展(zhǎn)，不(bù)仅(jǐn)为(wèi)免(miǎn)疫(yì)细(xì)胞(bāo)疗(liáo)法(fǎ)提(tí)供(gōng)了(le)可(kě)靠(kào)的(de)细(xì)胞(bāo)来(lái)源(yuán)，也(yě)为(wèi)癌(ái)症(zhèng)治(zhì)疗(liáo)和(hé)其(qí)他(tā)免(miǎn)疫(yì)相(xiāng)关疾(jí)病(bìng)的(de)治(zhì)疗(liáo)带(dài)来(lái)了(le)新(xīn)的(de)希(xī)望(wàng)。随(suí)着(zhe)CAR-T细(xì)胞(bāo)疗(liáo)法(fǎ)等(děng)先(xiān)进(jìn)免(miǎn)疫(yì)疗(liáo)法(fǎ)的(de)广(guǎng)泛(fàn)应(yīng)用(yòng)，如(rú)何(hé)高(gāo)效(xiào)、安(ān)全地(de)保(bǎo)存(cún)外(wài)周(zhōu)血(xuè)细(xì)胞(bāo)，成(chéng)为(wèi)医(yī)学(xué)研(yán)究(jiū)和(hé)临(lín)床(chuáng)应(yīng)用(yòng)的(de)重(zhòng)要(yào)课(kè)题(tí)。未(wèi)来(lái)，随(suí)着(zhe)技(jì)术(shù)的(de)不(bù)断(duàn)进(jìn)步(bù)，外(wài)周(zhōu)血(xuè)细(xì)胞(bāo)保(bǎo)存(cún)技(jì)术(shù)将(jiāng)更(gèng)加(jiā)成(chéng)熟(shú)，为(wèi)更(gèng)多(duō)患(huàn)者(zhě)带(dài)来(lái)福(fú)音(yīn)。通(tōng)过(guò)合(hé)理(lǐ)的(de)保(bǎo)存(cún)方(fāng)法(fǎ)和(hé)条(tiáo)件(jiàn)，我(wǒ)们(men)可(kě)以(yǐ)确(què)保(bǎo){干(gàn)扰(rǎo)符(fú)}外(wài)周(zhōu)血(xuè)细(xì)胞(bāo)在(zài)需(xū)要(yào)时(shí)具(jù)有(yǒu)最(zuì)佳(jiā)的(de)活(huó)性(xìng)和(hé)功(gōng)能(néng)，为(wèi)免(miǎn)疫(yì)治(zhì)疗(liáo)提(tí)供(gōng)坚(jiān)实(shí)的(de)基(jī)础(chǔ)。

综(zōng)上(shàng)所(suǒ)述(shù)，外(wài)周(zhōu)血(xuè)细(xì)胞(bāo)保(bǎo)存(cún)技(jì)术(shù)是(shì)现(xiàn)代(dài)医(yī)学(xué)和(hé)科(kē)研(yán)不(bù)可(kě)或(huò)缺(quē)的(de)一(yī)部(bù)分(fēn)。通(tōng)过(guò)非(fēi)冷(lěng)冻(dòng)保(bǎo)存(cún)和(hé)低(dī)温(wēn)保(bǎo)存两种方法，结合适当的🔵中国冷冻保护剂和保存条件，我们可以有效保持外周血细胞的活性，为未来的免疫细胞疗法提供可靠的细胞来源。这不仅推动了癌症治疗等领域的发展，也为患者带来了新的治疗希望。